全国统一热线:400-027-0273 注册/登录

分子生物学服务

.

详细介绍Detailed Introduction

亚细胞定位

背景介绍
       细胞是构成生物体的基本结构单位和功能单位,是生命的物质基础。细胞的结构复杂精巧且高度有序,根据功能和空间分布的不同,细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器,即亚细胞,其结构只能通过电子显微镜才能观察。常见的亚细胞有细胞核、细胞膜、内质网、高尔基体、细胞质、线粒体、叶绿体等。每种亚细胞中都存在一组特定的蛋白质,亚细胞结构为这些蛋白质行使功能提供了相对独立的生命活动场所。蛋白质在细胞质中经过翻译并合成,由蛋白质分选信号引导而被转运到特定的亚细胞中以参与细胞的各种生命活动,这一过程就称为蛋白质亚细胞定位。
       蛋白质亚细胞定位是分子细胞生物学的中心问题,也是蛋白质组学和蛋白质功能研究的重要内容。蛋白质的功能、代谢以及信号转导等生物过程都与其亚细胞定位密切相关,新合成的蛋白质必须处于合适的亚细胞位置才能正常行使功能,如果定位发生偏差,将对细胞功能甚至生命产生重大影响,因此对蛋白质的亚细胞定位的研究具有重要意义。

图 在原生质体中观察蛋白的亚细胞定位情况(Liu et al., 2020)

原理简介
       GFP、RFP等荧光蛋白因其独特的荧光性质和灵敏性,常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合,通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术,使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器,通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,确定目标蛋白的位置,从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。

图 植物细胞的各细胞器,来源:Sciencefacts.net。

表 我司原始亚细胞定位载体列表。可根据不同的需求,选择不同的荧光蛋白、连入不同的位置。


图 原始亚细胞定位载体pBWA(V)HS-gfp载体内留有两个BsaI酶切位点,可无缝连入目的基因。

图 重组后的亚细胞定位载体pBWA(V)HST-gfp,两个酶切位点被无缝替换成了目的基因。

适用场景
1、为明确基因功能提供信息;
2、推测蛋白质的生物学功能。

优势特点
1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术(专利号:US 10,144,936 B2)来进行亚细胞定位载体的构建,且该组装为无缝组装,可排除非必要的序列干扰实验结果;
2、我司建立了丰富的亚细胞定位载体资源,包含了基于红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、青色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白的载体库,方便选择使用;
3、拥有细胞核、细胞膜、液泡膜、内质网、过氧化物酶体、高尔基体、线粒体、叶绿体等多种细胞器的Marker载体,每种Marker都有多种荧光蛋白可选,以方便共定位时选择;
4、常备水稻、烟草、小麦、大麦、玉米、拟南芥等的原生质体以及烟草叶片,每周定期观察,可快速获得观察结果。
亚细胞定位实验中的细胞器 Marker 信息

 

实验流程
客户在线下单—订单/实验材料确认—CloneCAD实验设计—基因克隆或全基因合成亚细胞定位载体构建—遗传转化/瞬时转化—使用激光共聚焦显微镜拍摄照片  

实验周期
低至2天

客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、项目所需要的具体信息,价格由系统自动计算。
点击下单

实验信息
在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知,实验过程中客户可以随时登录客户管理系统査看项目实时进展情况。实验结题后,实验报告、检测结果可在线査看,并永久保留。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁。 

实验交付内容
1、重组载体的全序列信息和注释信息;
2、重组载体的酶切图谱;
3、重组载体的测序结果;
4、重组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌);
5、常规定位提供实验组和阳性对照组的荧光图、明场图、叠加图;共定位提供实验组和阳性对照组的荧光图、Marker荧光图、明场图、叠加图;可提供叶绿体自发荧光图片。

参考文献
Liu S, Liao LL, Nie MM, et al., 2020. A VIT-like transporter fecilitates iron transport into nodule symbiosomes for nitrogen fixation in soybean.New Phytol 226, 1413-28.
 
 


如果您觉得本站还不错,就请分享给身边的好友吧

拨打电话