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分子生物学服务

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详细介绍Detailed Introduction

STTM载体

背景介绍
       在上一节中提到了miRNA,miRNA在调节植物代谢、生长发育和产量性状、生物和非生物胁迫响应、重金属胁迫响应等多种生物过程中发挥作用。由于miRNA基因较小,且大多数miRNA家族有多个成员,对miRNA的功能研究主要是通过过量表达miRNA或miRNA的靶基因来实现,难以通过传统的功能缺失突变体进行功能研究,而短串联靶标模拟技术(short tandem targets mimic,STTM)提供了另外一种可能。

图 STTM165/166-48植株表现发育障碍(Yan et al., 2012)。(A)STTM165/166-48的载体设计策略,橙色表示间隔区和间隔序列,蓝色表示miRNA结合位点的凸起序列。(B)与空载对照(Vector)、MIM165和phb-1d相比,STTM165/166-48植株的表型。MIM165:采用靶标模拟(target mimic,TM)的方法构建的载体;phb-ld:PHB基因的显性遗传突变体。(C)与载体对照,MIM165和phb-ld植物相比,STTM165/166-48转化植株中靶基因PHB的qRT-PCR分析。(D)miR165/166的靶标基因是PHV、REV、ATHB-8、ATHB-15,检测这些靶基因的相对表达量,结果显示靶基因均升高表达。

原理简介
       STTM是人工合成的一段短串联靶标模拟物,中间有一段48nt左右的特定核昔酸序列,两端分别有目标miRNA结合位点,每段miRNA结合序列包括3个非互补碱基(CTA),该序列能与目标miRNA结合形成非完全互补双链,从而有效地阻止miRNA与目的基因结合,使miRNA沉默,使目的基因表达量升高(Yan etaL, 2012)。该技术已被广泛应用在拟南芥、水稻、番茄、大豆等miRNA的功能研究(Zhang et al., 2017)

我司载体介绍
       我司原始STTM载体中含有CaMV35S或Ubiquitin组成型表达启动子或其他启动子来启动转录单元的转录,载体上携带卡纳原核抗性和真核筛选抗性(可选潮霉素、Basta、G418或甘露糖进行筛选)。我们可以针对您的miRNA序列,设计引物后扩增预期片段,连入原始载体骨架,得到重组子后进行遗传转化实验,从而干扰miRNA。

我司原始STTM载体列表。可根据不同的需求,选择不同的启动子及真核抗性的载体。




图 重组后的STTM载体pBWA(V)HS-STTMTG,原始载体上留有的酶切位点被无缝替换成了STTM结构。

适用场景
       STTM技术是研究体内miRNA的有效工具,使miRNA的沉默,使miRNA的靶基因表达量升高。

优势特点
1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术(专利号:US 10,144,936B2)来进行片段组装及无缝组装;
2、载体资源丰富,除了上述常用的CaMV35S、Ubi启动子外,我司也提供G10-90、rbcS、Per、GluB-4、GluA-1等诱导型或特异性启动子的STTM载体构建服务,也可个性化订制您有其它需求的载体;
3、载体库中有多种真核筛选标记(可选潮霉素、Basta、G418或甘露糖进行筛选)的原始载体可供选择;
4、载体均为双元载体,可直接应用于后期单子叶和双子叶遗传转化;
5、可以与我司转基因服务、检测服务、蛋白服务等衔接,整个实验可以畅通且快速地完成。
 

实验流程
客户在线下单—订单/实验材料确认—CloneCAD实验设计—STTM载体构建—遗传转化—PCR鉴定阳性株系(后两步为可选项) 

实验周期
4个工作日
     

客户下单及项目信息填写:
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称,选择项目类型[STTM载体]、项目所需要的具体信息,价格由系统自动计算。   
点击下单

实验信息
在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知,实验过程中客户可以随时登录客户管理系统査看项目实时进展情况。实验结题后,实验报告、检测结果可在线査看,并永久保留。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁。

实验交付内容
1、重组载体的全序列信息和注释信息;
2、重组载体的酶切图谱;
3、重组载体的测序结果;
4、重组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌)。

参考文献
Yan J, Gu Y, Jia X, et al., 2012. Effective small RNA destruction by the expression of a short tandem target mimic in Arabidopsis. Plant Cell 24,415-27.
Zhang H, Zhang J, Yan J, et al., 2017. Short tandem target mimic rice lines uncover functions of miRNAs in regulating important agronomictraits. Proc Natl Acad Sci U S A 114, 5277-82.


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