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分子生物学服务

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详细介绍Detailed Introduction

 植物过表达载体/功能互补载体

背景介绍
       基因过表达技术是指将目的基因构建到组成型表达启动子、组织特异性启动子或目的基因自身的启动子下游,转入植物后实现基因表达量升高的目的。在植物研究中,对研究未知基因功能、调控已知功能基因的表达及互补突变体基因功能等,构建相应的过表达载体都是最基本的实验步骤和必要方法。

图 利用强启动子35S过表达转录因子LEC2和AtMYB23分别促使异常的胚和表皮毛形成(Zhang, 2003)。
 
图 在ptox突变体中过表达ptox基因使突变体表型恢复(Sharma et al., 2019)。

我司载体介绍
       我司原始过表达载体中含有CaMV35S或Ubiquitin组成型表达启动子或其他启动子来启动转录单元的转录,载体上携带卡纳原核抗性和真核筛选标记(可选潮霉素、Basta、G418或甘露糖进行筛选)。我们可以针对您的目的基因序列,设计引物后扩增预期片段,连入原始载体骨架,得到重组子后进行遗传转化实验,从而使目的基因过表达。

我司原始过表达载体/功能互补载体列表。可根据不同的需求,选择不同的启动子及真核抗性的载体。


适用场景
1、进行基因功能的研究,提高目标基因的表达水平;
2、可用于突变体的功能互补实验中,查看互补后能否恢复突变的表型,可按您的需求选择使用组成型表达强启动子或目的基因自身的启动子;
3、转基因应用,例如植物生物反应器生产目标蛋白、抗体、疫苗,构建植物体内代谢通路,获得抗虫抗病转基因品种等。

优势特点
1、采用我司已被授权的国际PCT专利技术(专利号:US 10,144,936 B2)来进行大片段组装;
2、载体资源丰富,除了上述常用的CaMV35S、Ubi启动子外,我司也提供G10-90、rbcS、Per、GluB-4、GluA-1等诱导型或特异性启动子的过表达载体构建服务,也可个性化订制您有其它需求的过表达载体;
3、载体库中有多种真核筛选标记(可选潮霉素、Basta、G418或甘露糖进行筛选)的原始载体可供选择;
4、基于无缝组装系统,对于单个、多个序列均可进行无缝组装;
5、载体均为双元载体,可直接应用于后期单子叶和双子叶遗传转化;
6、可以与我司转基因服务、检测服务、蛋白服务等衔接,整个实验可以畅通且快速地完成。

实验流程
客户在线下单—订单/实验材料确认—CloneCAD实验设计—基因克隆或全基因合成—过表达载体构建—遗传转化—PCR鉴定阳性株系(后两步可选)

实验周期
5-7个工作日

客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称,选择项目类型项目所需要的具体信息,价格由系统自动计算。         
点击下单

实验信息
在实验开始、结题关键节点系统会自动发送短信到申请人手机进行告知,实验过程中客户可以随时登录客户管理系统査看项目实时进展情况。实验结题后,实验报告、检测结果可在线査看,并永久保留。实验过程用到的菌株、载体、受体材料免费为客户保存半年后销毁。

实验交付内容
1、重组载体的全序列信息和注释信息;
2、重组载体的酶切图谱;
3、重组载体的测序结果;
4、重组载体:一份质粒、一份大肠杆菌菌液(25%甘油菌)。

参考文献
Sharma M, Kretschmer C, Lampe C, Stuttmann J, Klosgen RB, 2019. Targeting specificity of nuclear-encoded organelle proteins with a self-assembling split-fluorescent protein toolkit. J Cell Sci 132.
Zhang JZ, 2003. Overexpression analysis of plant transcription factors. Curr Opin Plant Biol 6, 430-40.


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