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蛋白相关服务

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详细介绍Detailed Introduction

凝胶迁移实验(EMSA)

原理简介
       凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA),其原理基于蛋白-探针复合物在凝胶电泳过程中比对照组迁移更慢,是一种用于检测蛋白与核酸相互作用的技术。根据实验设计特异性和非特异性探针,当核酸探针与蛋白样本混合孵育时,样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物,这种复合物由于分子量大,在进行PAGE电泳时迁移较慢,而没有结合蛋白的探针则迁移较快。孵育的样本在进行PAGE电泳并转膜后,蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带,说明有蛋白与目标探针发生互作。
图 EMSA基本原理示意图
适用场景
1、用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用;
2、可用于DNA定性和定量分析;
3、用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

凝胶迁移实验(EMSA)的优点
1、EMSA实验容易掌握,简单易行,要求的实验条件不苛刻,可以适应一定范围内的反应条件变动;
2、同位素标记探针具有非常短的半衰期并且对人的健康有害,而生物素标记更稳定、准确和方便,且亲和力高;
3、该技术可以检测的核酸分子大小(从几个到几千个核苷酸)和结构(单链、双链、三链、四链、环状核酸)范围很广;
4、在合适的条件下,在单个反应体系中就可以通过不同复合物的形成,检测不同蛋白与不同核酸分子之间的结合情况;
5、能检测的蛋白大小范围很广,从寡肽到转录因子复合物都能检测,并且该实验既可以使用纯蛋白也可以使用细胞提取物。

凝胶迁移实验(EMSA)的缺点
1、  无法衡量电泳过程中的化学平衡,在电泳过程中发生的快速解离会影响对复合物的检测;
2、在EMSA实验中,复合物的形成与许多因素有关,并不能直接反映分子大小或者鉴定复合物中的各种蛋白质;
3、EMSA实验不能提供蛋白结合在核酸上的准确序列位置;
4、EMSA在很大程度上属于定性实验,比如:可以检测蛋白-DNA复合物的形成与否,并不能精细的检测结合反应的上调或下调;
5、EMSA实验中并不考虑体内环境中影响蛋白DNA结合的因素,比如染色质的结构对复合物形成的影响,因此即使EMSA实验结果反映蛋白可以与DNA结合,在体内环境中也许还需要其它条件才能完成结合反应。
因此,EMSA适用于在初步研究蛋白与核酸相互作用时使用。

实验流程
样品制备—标记探针—形成蛋白探针复合物—配置EMSA胶—电泳—转膜—检测—提交详细的实验报告

实验周期

客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:
1、与EMSA相关的目的基因与蛋白信息;
2、样品种属及类型;
3、其他与EMSA相关的信息。

实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验交付内容
1、探针设计合成信息;
2、EMSA原始数据、结果图片;
3、实验报告:包括完整的实验步骤、使用仪器信息等。


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